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6分乳腺癌中经典的NF-κB信号通路

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发表于 2017-9-8 11:54:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
生信自学课堂
1、TBC1D3,可以引起乳腺癌细胞系中OLR1转录水平表达升高
作者通过高通量测序筛选在MCF-7细胞中过表达Flag-TBC1D3与对照质粒后具有差异的基因, OLR1基因表达上调。作者进行了荧光定量实验与免疫印迹实验证实过表达TBC1D3,可以引起OLR1转录水平与蛋白水平表达升高。
2、敲减OLR1可以减弱TBC1D3导致的乳腺癌细胞迁移过程
通过构建慢病毒载体的OLR1 shRNA,敲减细胞系OLR1基因,通过划痕实验发现敲减OLR1显著减弱细胞迁移能力,提示OLR1在TBC1D3导致的乳腺癌细胞迁移过程中可能参与重要作用。
3、TNF信号通路参与TBC1D3调控的OLR1转录以及乳腺癌细胞迁移过程
作者通过使用TNFα抑制剂Pomalidomide,发现可以显著减少细胞内TBC1D3以及的OLR1表达水平,细胞划痕实验证明乳腺癌迁移能力减弱,提示TNF信号通路在乳腺癌细胞迁移过程可能发挥重要作用。
4、TBC1D3 可以通过激活TNFα进而激活 NF-κB 信号通路
作者通过胞质胞核蛋白分离实验,提取过表达TBC1D3乳腺癌细胞中蛋白,进而检测P65表达水平,发现p65发生明显核聚集现象。当使用TNFα 抑制剂Pom,可显著抑制p65转运进入细胞核。
5、激活NF-κB 是 TBC1D3调控的OLR1转录以及乳腺癌细胞迁移必不可少的过程
作者通过使用NF-κB 抑制剂CAPE处理乳腺癌细胞,发现可以显著抑制TBC1D3调控的OLR1的转录水平,同时细胞划痕证明CAPE处理后,细胞迁移能力降低。提示TBC1D3调控的OLR1转录以及乳腺癌细胞迁移依赖于NF-κB的调控。

6、TBC1D3可以引起乳腺癌细胞中TNFα以及受体TNFR1 等多种TRAFs的释放
作者发现过表达TBC1D3后可以引起TNFα发生1.4-2.5倍的升高,蛋白水平检测发现TNFα受体中TNFR1、TNFR1、 TNFR5、TNFR6表达升高,提示T BC1D3可以参与激活TNFα/NF-κB信号通路,以及引起TNFα以及受体TNFR1等多种TRAFs 的释放。
7、TBC1D3可以增强乳腺癌细胞系中TNFR1的稳定性
作者通过向MCF-7细胞中转染Flag对照质粒检测发现TNFR1发现降解,在2h时,蛋白水平仅为刚转染时的40%。然后,过表达TBC1D3后,可以显著延迟TNFR1蛋白降解速度,在2h时,蛋白水平为刚转染时的65%。结果提示TBC1D3可以抑制TNFα诱导的乳腺癌中TNFR1的蛋白降解过程,且为依赖蛋白酶体的泛素化过程。


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