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microRNA发文照样可以6分

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发表于 2017-9-19 09:29:13 | 显示全部楼层 |阅读模式
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话说要是十年前,你研究miRNA,那可是热的不能再热的领域了,然而今天我依然在研究miRNA,有人就开始怼我了:还在研究miRNA呢,你做一大堆工作还不是只能发一两分,有意思吗?

之前我确实也有过这样的担忧,研究miRNA还有意思吗?正如之前做的在体外构建一个肺癌缺氧的模型,然后用芯片筛查miRNA差异表达,通过miRNA表达谱,得到实验组与正常组miRNAs的高表达和低表达,然后进行验证。这样的文章确实分数不高,但是也不能说研究miRNA就不能发高分文章了吧,来看看这篇,六分也是妥妥的。

MiR-127 and miR-376a act as tumor suppressors by in vivo targeting of COA1and PDIA6 in giant cell tumor of bone(链接看沙发回复)
发表在Cancer Lett上,首先简要地背景介绍:骨巨细胞瘤(GCTB)是原发性骨肿瘤的一种,虽然大体上属于良性肿瘤,但是由于一般与膨胀性溶骨性缺损相关,其具有高复发率和潜在的恶性转化。组织学上,骨巨细胞瘤包括各种多核巨细胞、组织细胞和成纤维细胞样基质细胞(gctsc)。

而gctsc应该能够代表骨巨细胞瘤群,因为它们不仅具有无限增殖的能力,而且有能在小鼠或受精鸡蛋的绒毛尿囊膜上的成瘤性。gctscs驱动肿瘤是由单核细胞的聚集和RANKL(受体激活NF-κBκ配体)介导的破骨细胞的形成。然而,促进肿瘤发展的分子机制还未知。

方法首先从组织样本中分离出主要的gctsc,进行传代培养。然后进行原代细胞系转染,提取细胞的总RNA进行逆转录和实时荧光定量PCR,然后进行鸡胚异种移植的体内实验,原位杂交,最后得出数据分析。

首先是候选miRNA和靶基因的鉴定,实验组GCT(巨瘤细胞)和对照组MSC(间充质干细胞)有差异表达的miRNAs,通过进一步控制条件和文献查阅已经报道的相关基因,锁定在miR 127-3p, miR-376a-3p和相关的靶基因COA1(细胞色素C氧化酶组装因子1)和PDIA6(蛋白质二硫键异构酶家族成员6)。
在对候选miRNA和靶基因表达的调控验证过程中,利用野生型WT和阴性对照NC来进行实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹,得到的结果是正如预期的那样,用miRNA模拟转染导致mir-127-3p和mir-376a-3p表达水平明显高于野生型和阴性对照细胞,因此,PDIA6和CoAl的表达通过miRNA表达的恢复和转染靶基因特异性siRNA而显著下降。
为了探讨候选miRNAs的恢复是否可能影响肿瘤细胞植入和生长的作用,将gctsc转染细胞株移植到鸡胚CAM。针对mir-127-3p和mir-376a-3p恢复是否抑制肿瘤体内植入和生长。

从图中也可以明显看出,在用gctsc细胞瞬时转染miRNA模拟物和移植后,根据测定每个异种移植的大小、体积等,发现肿瘤的发生率相当高,对mir-127-3p和mir-376a-3p恢复后肿瘤发生率减少到17%和47%。
同样,siRNA介导的miR-127和miR-376a沉默也在体内表现出抑制肿瘤的生长。
最后,文章总结出几点全文最重要的观点:

  • miR-127和miR-376a在体内作为肿瘤抑制剂;
  • 恢复miR-127和miR-376a的表达能够降低肿瘤的生长;
  • 沉默靶基因PDIA6和CoAl可以减缓肿瘤的生长。


统观全文,就是这三点翻过来翻过去地论证,值得一提的是文章中的异种移植的模型是通过gctsc转染细胞株移植到鸡胚CAM,有一定的创新性。看完文章,是不是觉得这六分的也不是太难,毕竟除了文章中作者用到的原位杂交和实时荧光定量PCR,我们还可以用芯片来筛查验证啊,而且还是可以一次性筛查四种RNA的哟,你懂得!

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 楼主| 发表于 2017-9-19 09:29:42 | 显示全部楼层
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链接: https://pan.baidu.com/s/1gfDzKOF 密码: mcvs
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发表于 2017-9-20 14:48:37 | 显示全部楼层
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我也要写个6分,感觉好难,2分也行
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